1.组织和细胞生理盐水均匀悬液的制备:仔细去除组织中的筋膜后研磨或将整个组织块放入匀浆器中匀浆。1z组织大约用lml生理盐水悬浮。 本文来自实验室前沿
2.将组织/生理盐水悬液置冰上5rain。
3.每2ml细胞悬液加8ml冷丙酮(—20C预冷)。充分混匀 ,置O℃作用30min,其间混匀数次。
4.10000g离心lOmin,弃上清液,收集沉淀物。
5.用—2012冷丙酮重悬并混匀,置O℃ lOmin。
6.10000g离心lOmin,弃上清液,将沉淀团转移至干净滤纸上,将沉淀物分散并让其在室温下空气中风干,直到沉淀物充分干燥和分散。
7.待粉末干燥后,转至密闭的容器内,弃去不能分散成粉末的大块沉淀。丙酮组织干粉的产量约为原湿重的10%一20%。使用时,加入终浓度为1%的丙酮组织干粉,4C孵育30min后,10000g离心lOmin,收集上清液作为经过吸收处理的抗体用于免疫学实验。