(1)改动样品试剂比例，影响一系列方法学参数。若比例增大，则线性范围缩小，线性反应时间缩短，样品内源性干扰、基质效应增加、旁路反应会增强，方法特异性也下降。若比例减少，检测信号偏低，信噪比(噪音／信号)增大，当仪器精度不高时，会加大测量误差。
(2)改动样品试剂比例，对某些反应有影响。如碱性磷酸酶(AI_P)，有文献报道：当样品试剂比例从1：25降至1：50时，酶活力测定值增加，再低于1：50时不再增加。这一效应可能是较高稀释度下AIJP多聚体解聚的结果。体液样品稀释也可能对测定结果产生影响：④大多数蛋白质在浓溶液中的分子构象比稀溶液中稳定，样品稀释可影响酶的稳定性。(2)降低样品中内源性抑制剂或激动剂的浓度，如以蒸馏水稀释血清，可能因降低血清中淀粉酶的激动剂氯离子的浓度，致测定淀粉酶结果偏低；随血清稀释倍数增加，肌酸激酶测定活力增加，可能与降低样品中AMt，、胱氨酸等内源性抑制剂有关。
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(3)双试剂时要兼顾R1、R2和样品三者的比例，尤其不宜改动试剂间的比例。R2要考虑仪器规定的加液最小体积，同一试剂瓶死体积下分液量小而浪费大的经济问题等。?水或可以指定的液体。它的主要用途有两个。一是用于浓缩试剂的稀释，或样品、校准品的稀释。二是在样品加量小的时候用来冲洗样品探针，减小携带误差；但用量不宜太多，以免稀释试剂影响反应。要把稀释水量纳入样品试剂比例和反应液总体积考虑。必要时，干粉试剂复溶也要考虑此因素。 copyright sysqy.com
四、试剂空白(Reagentblank)监测参数
无样品或以水代替样品在反应过程中观察试剂空白值或其变化情况，主要用于监测试剂质量及仪器稳定性，利用试剂空白对试剂本身或反应漂移引起的误差进行补偿，用以校正△A或△A/min。它与测定波长、光径大小、不同试剂及配方和样品试剂比例等有关，不能盲目套用，必要时宜实际测定。 本文来自实验室前沿
1．试剂吸光度上限和下限定点监测试剂的吸光度。它常用规定波长及光径下的吸光度值表示。仪器的试剂空白检测点因仪器和测定方法的不同而有差异。终点法常在PO点读数，连续监测法常以反应监测起始点来判读。仪器在试剂空白检测及相关的校准测定时，若监测到超过此参数的限值，则提示试剂失效或校准无效。反应吸光度向上的试验取上限值：如Trinder反应以酚或2-羟-3，5-二氯苯磺酸等和4-氨基安替比林作用，生成红色色素，试剂有一定的自发氧化，其试剂一般要求试剂吸光度上限≤0.1-0.4。以结合型硝基苯衍生物作为底物的ALP和GGT常要求≤0.6~0.8。反应吸光度向下的试验取下限值：如以NADH或NADPH为辅酶的ALT和Urea(紫外法)等试验，一般要求试剂吸光度下限≥1．0。
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2．试剂空白速率顾名思义，它是在反应过程中对试剂空白的变化速率作连续监测，其数值在样品测定结果中自动扣除。试剂中可能混有的其他杂酶或干扰物对试剂空白速率有影响。在酶促反应中，试剂空白速率也是试剂在监测过程中底物自发降解的结果。底物为还原型辅酶者，本身不稳定而分解，多呈下降趋势；以硝基苯酚或苯胺的衍生物作底物，在碱性环境中自发水解成被测物质，多呈上升趋势。此参数主要用于连续监测法。一般认为酶活性测定的试剂空白速率(△A/min)应≤0.001~0.003。由于试剂空白速率与仪器检测下限、正常参考范围下限等指标有关，有时也以浓度单位表示。要根据K值、仪器稳定性、方法允许变异而定。例如，ALT或AST40U/L以下活力浓度的分析误差应≤10％，其试剂空白速率应≤4．0U／L。一些仪器的程序参数中没有此参数，但我们应在试剂空白的测定资料中关注它，若资料波动大，须查找试剂或仪器原因。 实验室前沿，了解实验室动态
3．试剂空白的日常监测测定方法设置了试剂空白的项目，都要先行作试剂空白测定，在样品测定计算中自动扣除。由于试剂空白不是在每一个样品测定中实时测定并扣除，当样品测定中试剂的变化在未达到参数设置限值时不易发现，试剂空白扣除会产生误差。所以，应根据试剂的稳定性确定试剂空白及相关的校准的测定频率。连续监测法的试剂应每天(尤其在换另瓶或另批号试剂时)常规测定此参数。对样品的异常结果．也应及时对其测定吸光度资料(包括与试剂空白有关的资料，例如PO点读数)观察分析。
