1．原理 补体能使抗体致敏的羊红细胞发生溶血反应，根据溶血程度可测定补体总活性。以溶血百分率作纵坐标，相应的血清量为横坐标绘图，可知在50％溶血附近补体的量与溶血程度呈直线关系。因此以50％溶血作为终点较以100％溶血作为终点更为敏感。故称为50％溶血试验，即CH50(50％complementhemolysis)。 本文来自实验室前沿
2．主要试剂
(1)绵羊红细胞(sheepredbloodcell，SRBC)：自绵羊颈静脉采血，注入装有等量或二倍量阿氏(Alsever)液的无菌三角烧瓶中，轻摇3—5min，分装，4~C保存，可用2”3周左右。试验时，取一定量的SRBC用生理盐水洗涤3次，最后1次洗涤离心的条件每次试验要保持一致。试验时一般配成1X109SRBC／mL。为使每次试验时SRBC的浓度标准化，可根据经细胞计数器校准的浓度为1 X 109 SRBC／mL的细胞悬液，用分光光度计测定其OD541nm值，以后每次试验均参照此OD值校正SRBC浓度。
(2)溶血素(hemolysin)：即抗SRBC抗体，是以SRBC作为抗原免疫家兔所得。有商品出售，可按标示效价计算单位和稀释使用，也可自行制备和滴定。
(3)稀释液：三乙醇胺(TEAE)缓冲液(储存液)：TEAE 28mL，1mol／LHCl 180mL，NaCl75g，MgCl2·6H20 1g，CaC小2H20 0．2g，硫柳汞0．1g，或NaN3 0．5g，用蒸馏水溶至1 000mL。放4℃冰箱保存备用。
应用液：取TEAE储存液1份，加蒸馏水9份稀释即成。
(4)致敏SRBC：取2个单位的溶血素与1X109SRBC／mL悬液等量混和，放37cC水浴30min。温育过程中应经常摇动。致敏后用TEAE缓冲液洗涤3次后，制成5X10u／mL浓度的致敏SRBC悬液。
3．方法 先配制50％溶血标准管，在各试管中加入反应物，放37℃水浴60rain，以2000r／min离心10min；再与50％溶血标准管比较，观察溶血程度。
取与50％溶血标准管相接近的二管在分光光度计上分别读取OD541nm值，以最接近
50％溶血标准管OD值的一管，按下列公式求得50％溶血的总补体活性值。
血清总补体活性(CH50)=1/血清用量*稀释倍数
本法测得血清总补体活性的正常值为30～40CH 50U／mL。
上述补体总活性CH50测定方法由于每次试验需使用新鲜SRBC，细胞与细胞的批间差异也常因动物的个体和采血时间而异，且又是一种半定量的人工操作试验，迄今难以令人满意。1995年日本学者Yamamoto等创建一种脂质体均相免疫溶破试验，用于血清总补体活性测定。并由Wako公司研制成诊断试剂盒，包括两种试剂：试剂1为脂质体，它是由一个极性部分(磷脂中的胆碱)和一个非极性部分(磷脂中的烷基)组成的封闭性颗粒。在脂质体的内部水相中包入水溶性的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PDH)；在其脂质体双层内包裹抗原——二硝基苯酚(DNP)。试剂2为羊抗DNP抗体和酶底物——24mmol／L 6·磷酸萄萄糖(G6P)和9mmol／LNAD‘(辅酶1)。试验方法分为两步：①将lOlL血清样品与250pL脂质体(试剂1)混合，作用5min；②加入抗体和酶底物(试剂2)125~L，混匀。反应4．5～5min，用自动分光光度分析仪340nm波长测定酶反应物的吸光度。反应过程为试剂2中的抗DNP抗体与脂质体上的抗原(DNP)结合，形成抗原—抗体复合物，血清样品中的补体被激活，攻击并破坏脂质体的膜。脂质体膜溶破后释放出的G-6-PDH与酶底物的G6P和NAD’发生反应，产生的NADH在340nm测定其吸光度(A)。A值与血清样品中补体活性成一定比例关系。该法与经典的CH50溶血法对比测定结果的相关系数为r：0．87—0．923，且方法简便，快速准确，血清用量少，适用于自动分析仪测定。
