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活化部分凝血活酶时间测定(APTT)操作规程

时间:2010-04-12 04:24|来源:实验室前沿| 分享|点击:


一、项目名称:
活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time, APTT)
二、检验方法名称:
凝结法
三、方法学原理:
在确定量的血浆样本经过一定时间的加温后,加入试剂。加入试剂后,采用波长为660nm的光照射样本。凝血过程(纤维蛋白原转化为纤维蛋白)中血的浑浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定。从散射光光强度的测定,可以做出凝血曲线,通过Percentage Detection Method方法求得凝血时间。
四、方法学溯源:
37℃条件下,以白陶土激活因子Ⅻ和Ⅺ,以脑磷脂(部分凝血活酶)代替血小板,在Ca²+参与下,观察贫血小板血浆凝固所需时间,即为活化部分凝血活酶时间,是内源凝血系统较敏感和常用的筛选试验。
五、仪器:
(一)型号:Sysmex  CA—1500自动血液凝血分析仪
(二)分析和计算参数:
1.处理量:约120个测试/小时
2.所需样本量:50μl 
3.检验时间:在最长检验时间之内测出结果,典型最长检验时间:190秒
4.重复性:CV≤2%
六、试剂及配套品:
(一)试剂:
1. 肌动蛋白活化Cephaloplastin试剂(Dade® Actin® Activated Cephaloplastin Reagent)

sysqy.com

(1)商标:德灵(DADE BEHRING)
(2)包装规格:Pack for 10×4ml
(3)代码:B4218 G1 E0533 (0450) H/W
(4)成分:
脑磷脂(从干燥兔脑粉中提取)加入含有缓冲液、稳定剂和防腐剂的1.0×10-4M的鞣酸溶液。
2. 氯化钙溶液(Calcium Chloride Solution)
(1)商标:德灵(DADE BEHRING)
(2)包装规格:Pack for 6×15ml
(3)代码:ORHO 33
(4)成分:0.025mol/L的氯化钙溶液
3.佛罗那巴比妥缓冲液(Dade® Owren'S  Veronal Buffer)
(1)商标:德灵(DADE BEHRING)
(2)包装规格:Pack for 10×10ml
(3)代码:B4234 G25 E0533 (0461)W
(4)成分:
1)2.84×10­²M的巴比妥钠 (sodium barbital)
2)1.25×10­¹M的氯化钠 (sodium chloride)
3)  PH 7.35±0.1
4. 清洗液(Cleaning) 
2%次氯酸钠溶液(自配)

本文来自实验室前沿


(二)配套品:
1.标准血浆(Standard Human Plasma)
(1) 商标:德灵(DADE BEHRING)
(2) 代码:No. ORKL
2.校准质控血浆(Ci-Trol®)
(1) 商标:德灵(DADE BEHRING)
(2) 代码:Level 1, B4244-10
          Level 2, B4244-20
          Level 3, B4244-30
3.质控血浆(Control Plasma)
(1) 商标:太平洋(Pacific Hemostasis)
(2) 代码及规格:Level 1 (Normal), 100595  10×1ml
                Level 2 (Abnormal), 100596  10×1ml
                Level 3 (Abnormal), 100597  10×1ml
七、操作步骤: 内容来自实验室前沿网站
(一) 开机:开机前,先打开连机的打印机。按下机器右边的POWER按钮。开机后机器进行自检,当屏幕上边显示“Ready”时可以进行试验。
(二)洗针:在主屏幕上选“Rinse Probe”,然后按下“Execute”进行洗针。
(三)准备试剂:按照仪器试剂位置程序要求,把每一项的试剂准备好,放在相应的位置。
(四)准备标本:将室内质控和离心好的样本放在相应的样本架上(一个架子可放10个样本),准备好放在进样器上。
(五)准备反应杯:打开仪器上盖装反应杯的盖子,查看反应杯是否够量,需及时添加。
(六)输入试验项目:按下主菜单上的“Work List”键,在试验项目键点击APTT,使APTT键由“—”变为“O”。如有需要按屏幕下的“Repeat”键,仪器会自动重复十个样本的检测项目与第一个样本相同。屏幕右边的光标移动键,按下“NEXT”表示翻到下一个界面,按“↑”表示向上移动光标,“←或→”表示下一个界面试验项目。
(七)输入样本号:按下“ID No.Entry”,按顺序输入样本的序号或病人的病历号。 copyright sysqy.com
(八)开始检测:待一切准备工作就绪,按下仪器右上角“START”键,仪器开始工作。
(九)查看结果:返回主屏幕,检测的项目如果由“◎”变为“●”表明此试验已经完成,然后按下“Stored Date”(储存结果)键,屏幕会换到结果显示界面,检测的结果会自动传输到此画面,如果查看反应趋势图,按下边第一个菜单“Graph”,查看凝集趋势、吸光度、结果等。
(十)洗针:当做完一批标本以后,需要洗针,按下“Rinse Probe”,然后按下“Execute”进行洗针。
(十一)关机:回到主屏幕下,在洗完针以后方可关机,切断电源,关闭打印机。
八、 参考范围:
APTT (sec):31—43s
九、 临床意义:
(一) 受检者的测定值较正常对照延长超过10s以上才有病理意义。
(二)对内源凝血途径因子(Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ)缺乏较CT敏感(血小板异常不影响APTT)能检出Ⅷ:C小于25%的轻型血友病。对凝血酶原、纤维蛋白原缺乏则不够敏感,故APTT延长的最常见疾病为血友病。此时可进一步做纠正试验,即于患者血浆中加入1/4量的正常新鲜血浆、硫酸钡吸附血浆或正常血清(试剂参见凝血酶原消耗试验的纠正试验),再做APTT,如正常血浆和吸附血浆能纠正延长的结果而血清不能纠正,则为因子Ⅷ缺乏;如吸附血浆不能纠正,其余两者都能纠正,则为因子Ⅸ缺乏;如三者都不能纠正,则为病理性循环抗凝物质。 内容来自实验室前沿网站
(三)在使用肝素治疗时,多用APTT监测药物用量,一般以维持结果为基础值的2倍左右(1.5—3.0倍)为宜(75—100s之间)。但应事先检测所用部分凝血活酶试剂是否对肝素敏感,即向正常人血浆中加入不同量肝素(从每毫升0.1—1.0IU),看其APTT是否相应延长。
十、病人准备和标本要求: 
(一)采血时,首先应该确认病人姓名,并且将姓名和编号写在真空采血管的标签处。
(二)尽可能保证每次采血都在同样的条件下进行,即病人处于休息状态,并且在早餐前采血。
(三)凝血实验标本最好不与其它实验一起采集,否则由于标本的分配、分装等而使血液停留在针管的时间延长。
(二)取血时,病人应松弛,环境温暖,防止静脉痉挛,止血带的压力应尽可能小,取血速度平稳顺利,防止产生气泡。
(三)用定量为3毫升的一次性枸橼酸钠(0.11mol/L)真空采血管采血至指定刻度,抽血不足可使结果假性延长。取血完毕立即轻轻颠倒混均混合均匀,不要剧烈震荡,并避免产生气泡。
(四)及时离心,3000转/分离心标本10分钟,以除去血小板。
(五)务必于采血后3小时内测定完毕,如不能完成试验,冷冻贮存少量血浆(0.5—1ml)(最好在-70℃,或者当贮存时间较短时,可以置于-20℃条件下),在实验前将血浆于37℃下快速融化。血浆用塑料试管存放,并用塑料吸管移取标本。 sysqy.com
十一、操作注意事项:
(一) 许多的实验误差都来源于技术的错误。在实验技术、试剂、温度及PH值上很小的变化都会导致试验结果明显的变化。孵育时间与温度是凝血酶原时间测定时应严格控制的参数。血浆绝不能在37°C下放置10min。
(二) 实验前应检查血浆是否有溶血、黄疸、脂血或出现凝块。
十二、编写者:
      日  期:
十三、科主任签字:

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Tags:操作,测定,部分,时间,血浆,试剂,结果,试验,样本,APT
责任编辑:丁军

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